Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒内含两种染料：Calcein-AM和PropidiumIodide(PI)。该试剂盒可以在荧光显微镜下同时观察在同一个细胞培养皿中的活细胞和死细胞。Calcein-AM可透过细胞膜，通过活细胞内的酯酶作用脱去AM基团，产生的Calcein(钙黄绿素)发出强绿色荧光，因此活细胞在荧光显微镜下可被检测到绿色荧光。PI可以通过受损的细胞膜进入到死细胞内并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光，因此死细胞会被检测到红色荧光。除了用荧光显微镜外，也有报道可以用流式细胞仪和荧光酶标仪来进行定量检测。
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒荧光特性：Calcein-AM:λex=nm,λem=nmPI:λex=nm,λem=nm
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒染色案例：
细胞染色实例
（a）（b）（c）
1.Calcein-AM染FTC细胞（活细胞单染）2.PI染HCT细胞（死细胞单染）3.Calcein-AM、PI染MHD-1细胞（活死细胞双染）
Calcein-AM/PI最适浓度:由于不同细胞种类、细胞浓度的染色条件不同，我们建议自行摸索一下Calcein-AM和PI的最适浓度。Calcein-AM和PI的最佳浓度是根据不同的细胞种类而定，通过以下的操作，我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度：1.通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中培养10min或通过在70%乙醇中培养30min制备死细胞。2.用0.1-10μMPI溶液染死细胞，以便找到仅针对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。3.用0.1-10μMCalcein-AM溶液染死细胞，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度，再以此浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞是否被染色。
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒实验步骤以HeLa细胞为例制备1mmol/l的Calcein-AM储存液将μlDMSO加入到含μgCalcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。将1mlDMSO加入到含1mgCalcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。※Calcein-AM储存液需要避光，在-20℃密封保存。