背景介绍:
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)是在凝胶中不加入SDS和巯基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行凝胶电泳,常用于酶的鉴定,同工酶分析和提纯。蛋白质在电泳过程中是处于非变性的,电泳时蛋白的迁移率取决于蛋白的电荷和分子量,非变性电泳在完成电泳后,可以进行蛋白质活性测定(如果是酶的话,可以进行酶活检测)或者检测同功酶,或含亚基的完整蛋白的分子量,这些特点是SDS-PAGE所不具备的,因为SDS-PAGE使蛋白变性,亚基解离,无法体现含有亚基的蛋白的真实分子量,也无法进行后续的蛋白活性检测了。
非变性蛋白电泳分为经典非变性电泳,BN非变性电泳,碱性蛋白非变性电泳。
一,经典非变性电泳:
经典非变性电泳也称为Laemmlie非变性电泳,与SDS-PAGE相比,其实基本试验操作是相同的。最大的不同就是样品中的蛋白是没有变性的,所以电泳样品是没有煮沸的,而且样品处理液中也是不含去垢剂的。此外的差异还有:
1:在非变性电泳中,分离胶体系的pH为8.8,大多数蛋白质在这个条件下是带负电的。因此经典非变性电泳也称为酸性非变性电泳。
2:由于检测的蛋白要保持活性,非变性电泳尽量要冰浴电泳。
3:因为蛋白质未变性,含有亚基的蛋白肯定更大,泳动速度也慢(非变性条件下,蛋白所带的电荷一般来说也更少),胶的浓度还是小点好,5%-10%就行,或者用3-12%梯度胶。SDS-PAGE的条带区分开主要是靠分子量大小,而非变性电泳的话,分子量和所带电荷的多少都是影响因素,这个值得注意。
相关产品:
货号
名称
规格
价格
RTD
非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
50次
元
RTD
高分子量非变性电泳蛋白Marker(66-kD)
20次
元
RTD
非变性电泳蛋白质Marker(45-kD)
20次
元
PL
5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
10×1ml
元
二,BN非变性电泳:
BN(BlueNative)非变性电泳是一种从生物样品中分离蛋白质复合物的电泳技术。能够分离10kD-10MD的蛋白质复合物。BN-PAGE凝胶中以考马斯亮蓝G-代替SDS,使得蛋白质带上负电荷,根据分子量不同在凝胶中得到分离,复合物在凝胶中以蓝色条带形式呈现。样品用一些温和的去垢剂如DM(n-Dodecylβ-D-maltosiden-十二烷基-β-D-麦芽糖苷),OG(β-D-glucopyranoside辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷),毛地*皂苷,TritonX-等溶解,从而使复合物以近似天然的状态分离。在植物蛋白复合物研究中,在电泳时,结合叶绿素的蛋白质复合物呈绿色,而不含叶绿素的呈蓝色,因此称之为蓝绿温和胶电泳。
相关产品:
货号
名称
规格
价格
RTD-
3-12%RealPAGEBis-Tris预制胶(用于Blue/Clear非变性电泳)(适用于伯乐电泳槽)
10板/盒
0元
RTD-
4-16%RealPAGEBis-Tris预制胶(用于Blue/Clear非变性电泳)(适用于伯乐电泳槽)
10板/盒
0元
RTD-
3-12%RealPAGEBis-Tris预制胶(用于Blue/Clear非变性电泳)(U型板,通用型)
10板/盒
0元
RTD-
4-16%RealPAGEBis-Tris预制胶(用于Blue/Clear非变性电泳)(U型板,通用型)
10板/盒
0元
RTD
Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(适用于伯乐电泳槽)
10次
1元
RTD
Blue/Clear非变性PAGE电泳试剂盒(U型板,通用型)
10次
1元
三,碱性蛋白非变性电泳:
各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同,因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质称为碱性蛋白质,等电点偏碱性,如组蛋白、精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质,等电点就偏酸性。分离碱性蛋白时候,要利用低pH凝胶系统,分离酸性蛋白时候,要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会相阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。
特别说明:由于本系统采用非连续凝胶系统,分离胶pH为4.3,因此要求待分离的蛋白等电点pI>7.0,这样碱性蛋白在酸性凝胶系统内带正电荷,在凝胶电泳中才能正常向阴极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI<7.0,请选择经典Laemmli活性凝胶系统分离(货号:RTD)。
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货号
名称
规格
价格
RTD
碱性蛋白非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
50次
元
RTD
碱性蛋白非变性电泳蛋白Marker
50次
元
PL
5×甲基绿碱性蛋白上样缓冲液
10×1ml
元
使用非变性电泳产品发表部分文章列表:
1.[IF=3.]IL-34RegulatestheInflammatoryResponseandAnti-BacterialImmuneDefenseofJapaneseFlounderParalichthysOlivaceus.
Author:ChaoYu,PengZhang,Teng-feiZhang,LiSun.
Journal:FishShellfishImmunology.AcceptedDate:26May
产品:RTD非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
2.[IF=5.]BiochemicalcharacterizationofathermophilichyaluronatelyaseTcHly8CfromThermasporomyces